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胰酶的作用原理是什么呢？胰酶是一种蛋白酶，酶切位点是肽链的Lys或Arg两个残基的羧基端肽链，通过在特定位置上降解蛋白，使细胞膜上和培养皿结合处蛋白降解，从而使两者分离。这时细胞在自身内部细胞骨架的张力以及培养液表面张力的作用下成为球形。使用胰酶时需注意哪些细节问题？在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CDMarker也可能会下降。胰酶进行分装时尽量分装成多瓶，并遵守3次左右用完和只装2/3体积的原则。因为冷冻保存时液体体积会膨胀，多次使用同一瓶胰酶反复冻融会降低消化效果并可能造成污染。胰酶适用于消化细胞间质较少的软组织和传代细胞，如胚胎、上皮、肝、肾等组织，但对于纤维性组织和较硬的*组织效果较差。胰酶消化效果主要与pH值、温度、胰酶浓度、组织块大小和硬度有关。胰蛋白酶消化液都由已经过猪细小病毒检测和支原体检测的原料制备。海南进口胰酶是什么

胰蛋白酶的作用是使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37°℃时，胰酶溶液的作用能力**强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如:D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。海南进口胰酶是什么EDTA是一种化学螯合剂，主要作用在于能螯合Ca、Mg离子，使细胞分离。

在组织细胞的体外培养和原代细胞培养中的组织细胞分散（将组织块制备成单个细胞悬液）以及传代细胞培养中，贴壁生长细胞的消化分散均要使用组织细胞消化液。常用的消化液为胰蛋白酶 (Trypsin) ，EDTA 等。胰蛋白酶是一种丝氨酸水解酶，它能把多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基侧切段，水解细胞间的蛋白质，破坏细胞间的连接，从而使组织或贴壁细胞离散成单个细胞。胰酶分散细胞的活性与组织或细胞的特性、胰酶浓度、温度和作用时间有关，在PH 8.0和37℃时，胰酶的作用能力**强，因此使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。一般常用胰酶的工作浓度为0.25%，而半贴壁细胞或对胰酶敏感的细胞常采用低浓度（0.05%）的胰酶进行细胞消化。由于EDTA能够螯合Ca2+和Mg2+，从而破坏细胞连接促进细胞的解离，因此在胰酶溶液中常常会加入一定量的EDTA混合使用，以增强解离效果。

    EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是说，尽量不要用水来溶，因为要保持渗透压。2、EDTA的工作液溶度是－，根据细胞消化的难易程度自己调整。EDTA并不是必须的，容易消化的细胞可不加。EDTA对细胞贴壁性有影响，因此使用时要甚重。如果影响贴壁，但消化时必须要用，那么在用完全培养基终止消化后，可离心弃上清，再加完全培养基培养，可去除EDTA。如果对贴壁没影响，那么可不离心。3、EDTA的浓度也是质量体积比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可终止胰酶的作用，但不能终止EDTA的作用，对有些细胞来说，终止消化后的离心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH为8左右的时候**易溶解，在配制时可先滴几滴NaOH将pH调至8，注意，胰酶可使溶液变酸，所以要边溶边测pH，随时调整。注意，不可加过量NaOH，否则过碱，细胞会受不了。6、胰酶EDTA相对比较难溶，可用磁力搅拌器，或放入4度冰箱过夜，待溶解后过滤除菌。7、可配2－3乘的胰酶，这样比较节约时间和滤器，用的时候对上灭菌PBS即可。8、储存液放在－20度冰箱冻存，使用液放在4度，用的时候不要放在27度水浴锅温浴，因为这样会让胰酶很快失效，使用前放在室温下一会，因为加的量很少，所以一般不会冻坏细胞。9、消化时。 细胞消化时，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是没有问题的。

    胰酶使用注意：1、在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被**污染。2、胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差。贴壁细胞的消化：1、吸去培养液，用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次，以去除残余的血清2、加入少量胰酶细胞消化液，略盖过细胞即可，根据胰酶效率差异可以增加惑减少胰酶用量。室温放置30秒至2分钟（不同的细胞消化时间有所不同）3、显微镜下观察，细胞明显收缩，并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化呈白茫状；或者用***吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来。4、此时吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的完全细胞培养液，吹打下细胞，即可直接用于后续实验如果发现消化不足，则加入胰酶细胞消化液重新消化。如果发现细胞消化时间过长，未及吹打细胞，细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落，直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟，沉淀细胞，尽量去除胰酶细胞消化液后，加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞，即可用于后续实验。常用的细胞消化液为胰蛋白酶（Trypsin），EDTA等，其功能主要是使细胞间的蛋白质（如细胞外基质）水解，改变细胞间的连接。胰酶可在-20℃下保存一年。海南进口胰酶是什么

胰酶使用的时候要注意什么？海南进口胰酶是什么

胰蛋白酶**初在牛的胰腺中被发现，现在已经扩展到多种来源，包括哺乳动物（人、牛、猪和狗）、无脊椎动物和微生物等。胰蛋白酶的商业化生产主要依赖哺乳动物的胰腺组织提取或者重组表达提取。直接从哺乳动物胰腺组织中提取的缺点是生产成本高，易造成其他结构相近的蛋白污染。重组表达提取胰蛋白酶可以缩短提取时间、降低生产成本，提取的蛋白纯度高，通过优化重组表达体系可以提高蛋白的表达量，这些优势为其在医疗、食品等行业中的应用提供了更多的可能性。[1]折叠海南进口胰酶是什么